J9九游会

J9九游会

 > 

资源中心

 > 

送样建议

单细胞转录组

声明:
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》(点击查看)的所有样品。对于高毒性动植物等样品,必须事先通过销售、客服或运营经理与J9九游会技术人员联系,确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项:核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系,尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响,因此较难保证单次提取满足质量要求,客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸,请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本,建议自行提取。取样过程中,需要全程佩戴手套,并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒,以免样本污染

1.样本寄送流程及注意事项

  • 1.1新鲜组织及血液样本寄送

    (1)用组织保存液保存新鲜组织进行寄送,基本流程如下: 注:合同签订后,申请组织保存液至客户单位,寄送样本至公司(血液无需申请保存液)
    邮寄样本前需发邮件给邵海燕shaohaiyan@novogene.com,抄送scrna-sp@novogene.com,样本制备预警邮件发送模板指南如下:有流式细胞分选需求,需在备注中注明分选要求
    (2)组织保存液寄送样本
      客户收到组织保存液后(见STEP2图),组织保存液应在4℃条件下保存(效期6个月,有沉淀/冻融后不可使用),切勿冻存;
      寄样时,先将样本放入装有组织保存液的储存管中,组织尽量无菌放入液体中,组织保存液应当浸没组织,然后迅速盖紧加封口膜包装好。
      组织保存液寄送样本小Tips:
      Step1、首先准备一个泡沫箱和适量冰袋,注意请勿使用-80℃冰箱冰袋用于邮寄样本
      Step2、标明样本名称,用适量的塑料泡沫对装有组织的保存液管进行包裹
      Step3、确保管子包裹完好
      Step4、用保鲜膜或者胶带封好
      Step5、置于冰袋上,保证不和冰袋直接接触
      Step6、找一些填充物进行填充,确保样本在其中不会过多震荡
    注意:寒冷天气下,可借助保温桶等设备防止组织结冰;胰腺类样本注意申请特殊组织保护液(申请时备注即可);
    图1 组织保存液寄送样本小Tips   大于0.2g实体瘤组织(如需进行流式分选,根据分选的要求样本量通常要大于0.6g,具体个性化分选需求的组织用量可同后台沟通,送样同时现阶段需客户提供流式相应的抗体,后期公司可提供常用抗体),保护液能完全浸没组织为宜,一般样本1mL可保证浸没; 图2 组织保存液浸润样本示例   血液(全血)/骨髓血样本置于EDTA抗凝管中,人4mL(特殊治疗/疾病需6mL,冻存PBMC细胞量需5×106 cells),鼠1-2mL;目前除了人和小鼠的血液样本可以制备PBMC/BMMC之外,其余物种均需要联系J9九游会进行评估。
      如样本量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复,以防万一;
      客户需标明:样本名称,组织类型,离体时间,浸入组织保存液时间;
      寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触,需用泡沫包裹,保证4℃左右的低温环境;
      冰袋寄送(注意不要选择干冰),务必保证在48小时内到达北京、天津、广州、上海或成都、杭州的单细胞样本接收室。
      新鲜组织送样量
    常规组织 常规肿瘤、器官组织等 绿豆 达到0.08g可以尝试有风险,细胞量可能偏少。
    黄豆 正常,可以尝试,细胞量通常可以达到上机要求。 坏死类需适量提高送样量。
    花生 正常,可以尝试,细胞量通常十分充足。 坏死类需适量提高送样量。

    腺体类肿瘤及癌旁(例乳腺、胰腺、肝脏、肾脏、肠道、性腺、卵巢、垂体等)

    花生

    正常,可以尝试,细胞量通常十分充足,最少0.6g(3粒黄豆大小)。
    胰腺类注意申请特殊组织保护液(胰腺/胰腺癌)。

    皮肤类

    皮肤

    花生壳

    正常:要求送样量达到1g为宜,组织量大约为一个花生壳大小(1cm*2cm)。
    疾病、坏死、角质化严重:要求送样量为正常的2倍,约2g,2cm*4cm。

    脑组织类

    花生

    人:400mg。
    小鼠(成年):半脑。

    骨组织样本

    软骨类 花生

    软骨组织需要1g(一颗中等花生米大小)以上的组织量,达到送样量通常消化后细胞量充足。

    硬骨类

    成人中指指甲大小(2-3块

    硬骨组织需要10g以上的送样量,可事先用骨钳将组织处理成1cm*1cm左右的小块(10g大约2.5-3块左右),达到送样量通常消化后细胞量充足。

    血管类 人主动脉、肺动脉及静脉 花生壳

    动脉:要求送样量达到1g为宜,组织量大约为一个花生壳大小(1cm*2.5cm)。
    静脉:要求送样量为动脉的2倍,约2g,2cm*5cm。

    小鼠血管 2根

    数量若干根,总量达到6cm为宜。

    体液类、冲洗液类

    脑脊液、胸水、腹水、滑膜液、肺泡灌洗液

    15-50mL

    送样建议:无菌取样,提取体液后,直接放入15ml或者50ml离心管中;冲洗液类建议100mL以上。并做好标记。由于此类样本细胞得率低,建议尽可能多提供。
    样本寄送:置于4℃环境进?保存运输。

    其他类型 穿刺样本

    直径1mm穿刺条(大致曲别针粗细)

    长度>2cm,可以尝试,细胞量无法保证;
    2cm>长度>0.5cm,有一定风险,可以尝试,细胞量有可能无法达到上机要求;
    长度<0.5cm∶高风险,不建议送样。

    小鼠十二指肠绒毛

    建议2cm长度

    一只成年小鼠全部十二指肠绒毛
    组织要求:切除十二指肠,将肠内容物轻轻冲洗干净,待到制备前打开肠道,刮下绒毛。
    运送时间:最好在6h内制备并上机。不建议寄送。

    鼠类胰腺

    如图组织量可以制备千万级细胞

    一只成年小鼠,细胞量足够
    组织要求:干净的胰腺,剔除肠系网膜。
    运送时间:最好24h之内。
    注意申请特殊组织保护液(胰腺/胰腺癌)

    备注:由于穿刺类样本的特殊性,建议使用一般14或16G穿刺针,且均按照风险样本对待。
  • 1.2新鲜细胞悬液仅适用于同城寄送

    (1)客户自选缓冲液需注意选用无钙、镁、EDTA等影响酶活性物质,官方推荐含0.04% BSA的PBS;
    (2)细胞量尽量保证在1×106cells以上;
    (3)如需流式分选,分选后目的细胞尽量保证在1×10^5cells以上(寄送前提前联系);
    (4)冰袋寄送(注意不要选择干冰),?寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触,需用泡沫包裹,保证4℃左右的低温环境; (5)寄送时间小于2小时
  • 1.3冻存细胞干冰寄送

    (1)客户冻存细胞寄送方法 1)分离的细胞梯度冻存(程序降温仪或者异丙醇-80℃过夜后液氮保存);建议冻存密度3-6×10^6cells /mL(管),每管1mL;如细胞量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复,以防万一;
    2)将液氮保存的细胞,干冰寄送,干冰量需充足;
    3)寄送前发送邮件给邵海燕,抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”;主题:XX项目细胞复苏制备预约,邮件中写明合同信息、客户单位、样本名称、样本个数、细胞类型、实验类型,确保送到时可以直接进行复苏及单细胞捕获建库;
    4)细胞复苏后活率大于75%将直接进行上机,活率小于75%的细胞J9九游会不建议上机;如样本珍贵,和客户沟通后,由客户决定是否上机。
    注:细胞冻存请使用专用的细胞冻存管;建议首次寄送预实验时同一处理(每一个重复)送 2-3 份样本,以做备选;
    (2)细胞冻存方法(如客户细胞尚未冻存,可提供如下冻存方法)
    1)将制备好的单细胞悬液离心(300-500g,5分钟,4℃),去上清,细胞缓冲液重悬后计数(浓度700-1200 cells/μL),调整细胞总量5-10×106cells(冻存细胞风险较大,如需流式需提前跟客户说明风险);
    2)备注:客户实验室需备台式冷冻离心机(水平转子15mL离心管适配器);注意试剂和仪器无菌,操作过程要求无菌操作;
    3)对于活性大于80%的细胞进行离心(300-500g,5分钟,4℃),去上清,加入冻存液,重悬细胞,然后将1mL细胞悬液加入到细胞冻存管中,拧紧盖子;
    4)将细胞冻存管放到程序降温盒中(推荐异丙醇冻存盒);将程序降温盒放入到-80℃,24小时后选择干冰寄送或者液氮保存;
    5)干冰寄送:将细胞冻存管放到干冰中,冻存管做好标记(样本名称、冻存时间、客户单位、姓名),选择干冰15-20公斤(夏季可以适度增加)。
  • 1.4冻存组织寄送(液氮速冻组织寄送抽核处理)

    冻存组织基本流程如下: (1)寄送前发送邮件预约实验;
          寄送前销售发送邮件给邵海燕,抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”;
    邮件发送模板参考单细胞组织样本到样预警模板
    (2)组织样本要求:
          一般组织建议0.2g-0.5g/管(如需进行流式分选,0.6-1g/管,不同组织有差异),组织液氮速冻,如样本量足够建议首次寄送同一样本2-3管重复,以作备用
          若穿刺样本量少,则不质控直接抽核,需要提前告知客户风险性
    (3)干冰寄送至天津实验室,收样人为样本组,需要录样,确保干冰量充足
    (4)10x官网建议:在整个实验过程中RNA酶抑制剂浓度是1U/μL
    风险提示:抽核后质控为显微镜观察,非定量判断,有一定误差;另外非哺乳动物细胞文献及标准比较少,对于单核测序来说,存在风险;请客户知悉。
  • 1.5植物样本寄送

    (1)植物样本要求 植物类样本支持原生质体制备与植物抽核制备,均需寄送活株。 寄送过程中可以使用木架固定培养瓶及幼苗,以保证运输途中植物完整性及状态的稳定性。
    制备的目标组织量建议>2g,幼嫩组织优先,木质含量高的组织类型成功率不稳定,需客户知悉。
    (2)关于特殊样本类型
    含淀粉样本(如甘薯、人参、三七、马铃薯等)无法进行原生质体制备,只能抽核处理; 对于抽核类样本,如样本涉及真菌侵染、细菌处理、病毒、虫害等处理,需要确认样本详细情况,是否存在寄生/残留,如有残留/寄生,则无法通过流式进行核悬液的纯化实验。
  • 1.6类器官组织寄送

    送样建议:类器官细胞得率低,建议尽可能多提供,或进行预实验测试细胞得率
    (1) 悬液类样本量:大于2x106 cells
    (2) 离心后的沉淀样本量:黄豆大小,建议大于0.2g
    (3) 新鲜样本寄送过程中建议使用类器官的完全培养基,冰袋寄送或同城闪送(推荐),48h寄送到J9九游会单细胞实验室
    (4)冻存组织建议尽量去除类器官培养基,液氮速冻
    (5) 需提前确认类器官是否含有支架,如含支架,需提供支架材料的溶解方案或试剂
  • 1.7动物样本寄送

    (1)常规样本
    对于常规动物组织样本、血液等,上机要求和单细胞转录组捕获上机质检标准一致,寄送要求同2.1-2.4送样建议;
    其中血液(全血)/骨髓样本,如需制备PBMC/BMMC,除人和小鼠之外,其余物种均需要联系J9九游会进行评估。
    (2)非常规样本
    对于非常规样本,诸如鱼类、贝类等,建议进行活体寄送,放置在养殖液体中,充氧寄送至天津实验室。(解剖需老师协助)
  • 1.8 FFPE样本寄送

    (1)石蜡块:优先建议提供石蜡块(带卡槽),要求被包埋组织横截面积>0.5cm2,蜡块密封后冰袋寄送
    (2)石蜡卷:要求石蜡卷现切现用,先送质检样本,质检合格后再送正式样本
    质检样本要求:5?m厚度5-6卷,现切现用(7天之内),置于EP管内,密封后冰袋寄送;
    正式样本要求:25um厚度4-6卷,现切现用(7天之内),每两张石蜡卷,置于一个1.5ml EP管内,密封后冰袋寄送,切片厚度不可减小,需保证石蜡卷完整性;
    FFPE样本寄送至天津单细胞实验室,质检样本/正式样本均需要制备预警邮件,并附件FFPE样本基本信息,如FFPE样本寄送至样本组,务必备注样本放于4℃,切勿放在-80℃
  • 1.9体液类/冲洗液类样本寄送

    (1)送样建议:无菌取样,提取体液后,直接放入15ml或者50ml离心管中,冲洗液类建议100mL以上。并做好标记。由于此类样本细胞得率低,建议尽可能多提供。
    (2)样本寄送:置于4℃环境进?保存运输。

2.样本寄送信息

天津:
  新鲜样本/FFPE样本/捕获完成的cDNA收件人:单细胞:18522138772
  冻存组织收件人:J9九游会样品组:18526699037
  邮寄地址:天津市武清开发区创业总部基地B07
北京:
  1)送样前与北京单细胞实验员联系:
  2)收件人:单细胞:15692242863
  地址:北京市朝阳区酒仙桥北路甲10号院301号楼101
广州:
  1)送样前与广州单细胞实验员联系:
  2)收件人:单细胞:13212047356
  地址:广东省广州市黄浦区开源大道11号C6栋西门702
上海:
  1)送样前与上海单细胞实验员联系:
  2)收件人:单细胞:17602619385
  地址:上海市闵行区绿洲环路790号生命健康科学城9号3幢
成都:
  1)送样前与成都单细胞实验员联系:
  2)收件人:单细胞:18522589457
  地址:四川省成都市武侯区国学巷37号华西医院医学转化楼8楼
杭州:
  1)送样前与杭州单细胞实验员联系:
  2)收件人:单细胞:13001325524
  地址:浙江省杭州市余杭区留泽街3号楼三楼

3.注意事项

(1)保存液中寄送新鲜组织务必保证48小时内到达天津、北京、广州、上海实验室,干冰寄送冻存组织只能寄送至天津实验室,项目启动前务必提前和邵海燕预约,确保到达时间以及实验室可安排人员操作;
(2)以上方案供客户选择,推荐保存液中寄送新鲜组织消化,或冻存组织抽核。10x技术因为构建细胞图谱而发展,本身更适用于新鲜样本制备单细胞悬液,任何操作都可能对细胞类型与基因表达造成一定影响。因此,采用寄送样本的客户课题方向不推荐细胞全图谱构建类型。不论选择哪种方案,均建议首次送样同一处理送2-3份样本,以做备选;
(3)干冰寄送过程中确保到实验室时干冰仍有剩余,推荐尽量48小时内到达。
(4)单细胞悬液质量很大程度取决于组织状态,离体、病变、脆弱细胞类型、酶的分泌等均可能影响细胞活性。因此不能承诺所有样本制备均成功上机。
(5)流式分选所需样本量有所增加,一般组织样本最少0.6g,PBMCs 5-15mL,其他要求一致。目前可承接人类组织的CD45分选,CD45抗体由J9九游会提供。其他分选类型不提供抗体,且需提前和实验室沟通评估,一次最多分选4种细胞类型。抗体推荐Biolegend或BD公司(提醒客户注意抗体识别细胞膜蛋白还是核膜蛋白,对于做单细胞和单核的抗体可能有差异,以及注意区分抗体适用物种)。

Copyright@2011-2024 All Rights Reserved    版权所有:J9九游会    京ICP备15007085号-1

一对一业务咨询

一对一业务咨询

在线客服

联系方式

联系电话

400-658-1585

企业邮箱

service@novogene.com
返回顶部
Sitemap